外泌体组学
挖掘细胞间通讯的微小载体，助力疾病早期筛查与精准作用机制研究。
外泌体全转录组测序
外泌体全转录组测序（Exosome Whole Transcriptome Sequencing, EWTS）是针对细胞外囊泡（外泌体）中全部RNA分子（包括mRNA、长链非编码RNA lncRNA、环状RNA circRNA、微小RNA miRNA等）进行的高通量测序技术。外泌体作为直径30-150nm的膜性囊泡，广泛存在于血清、血浆、尿液等体液及细胞培养上清中，其携带的RNA是源细胞选择性分选的功能分子，可通过细胞间通讯调控靶细胞表型，是源细胞生理病理状态的分子镜像。外泌体RNA具有独特优势：经囊泡膜保护，避免RNA酶降解，稳定性远高于游离RNA；富集特定功能RNA亚型，特异性强；样本获取无需侵入性操作，临床适用性广。EWTS已成为疾病早期诊断标志物筛选、外泌体介导的细胞通讯机制研究、临床疗效监测与预后评估等领域的核心技术，尤其适用于肿瘤、神经退行性疾病、心血管疾病等无法便捷获取组织样本的研究场景。
原理介绍
外泌体全转录组测序的核心原理是外泌体纯化富集→RNA提取→全转录组文库构建→高通量测序→功能解析，具体流程如下：外泌体分离与纯化，从体液或细胞培养上清中分离外泌体，常用方法包括超离心法、密度梯度离心法、商业化试剂盒法，结合0.22μm滤膜过滤去除细胞碎片与游离RNA，最终通过NTA、Western blot、透射电镜验证外泌体纯度；RNA提取，采用高灵敏度RNA提取试剂盒，从纯化的外泌体中提取总RNA，通过DNase I消化去除基因组DNA污染，确保RNA纯度；全转录组文库构建，针对不同RNA类型设计双文库策略；高通量测序，采用Illumina NovaSeq、MiSeq等二代测序平台，长链RNA文库测序深度≥6G，小RNA文库≥10M reads，保障低丰度转录本的检出；数据处理与分析，功能富集。该技术通过聚焦外泌体中功能RNA的整体表达谱，以非侵入性方式精准捕获源细胞的分子变化，为疾病机制研究与临床转化提供高价值数据。
文献案例
《Molecular Cancer》期刊发表题为“Exosomal circ_0006896 promotes AML progression via interaction with HDAC1 and restriction of antitumor immunity”的研究论文，circ_0006896在AML患者的外泌体和细胞中显著上调，且与不良预后和复发显著相关。体外和体内研究表明，敲低circ_0006896抑制AML细胞增殖、增强化疗药物敏感性，并诱导铁死亡。在表观调控方面，circ_0006896直接结合HDAC1的催化结构域，增强其与组蛋白H3的相互作用，降低H3K9/K27乙酰化水平，从而抑制与花生四烯酸代谢相关基因的转录，最终抑制AML细胞中的脂质过氧化和铁死亡。在免疫逃逸方面，AML外泌体递送circ_0006896至CD8+ T细胞，通过HDAC1抑制转录因子LEF1的表达，削弱IFN-γ和颗粒酶B的分泌，导致T细胞功能衰竭。研究通过EWTS发现，急性髓系白血病（AML）细胞及外泌体中circ_0006896显著上调，其通过与组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）相互作用，抑制抗肿瘤免疫相关基因（如IFN-γ、GZMB）的转录，导致CD8⁺ T细胞功能受损。该circRNA可作为AML化疗耐药及免疫逃逸的关键驱动因子，为靶向治疗提供新靶点。
送样标准
血清≥5mL；血浆≥5mL；尿液≥10mL；脑脊液≥2mL；唾液≥3mL；
≥20mL；
≥200μL；
总量≥100ng。
交付内容
数据质量控制报告
外泌体纯度鉴定、RNA质量评估、测序质量评估；
录本检测与注释结果
表达量矩阵、差异表达分析、数据库注释；
功能分析结果
GO/KEGG/Reactome通路富集分析图、ceRNA调控网络示意图（miRNA-lncRNA/mRNA相互作用关系）；
分析与解读报告
检测结论、结果解读。
常见问题
适合。外泌体RNA总量通常为ng级，采用以下方案保障结果可靠性：①选用高灵敏度RNA提取试剂盒，回收率可达80%以上；②使用低起始量文库构建试剂盒；③提高测序深度（长链RNA≥8G，小RNA≥15M reads），增加低丰度转录本的覆盖度；④数据分析时采用严格的过滤标准，降低假阳性。
适合。尿液外泌体来源广泛，样本易获取、无创，尤其适合泌尿系统疾病及全身性疾病的研究。需注意：①采集清洁中段尿，避免细菌污染；②添加RNA保护液（如RNAlater）防止RNA降解；③尿液样本体积需≥10mL，确保外泌体产量满足后续实验。 外泌體 lncRNA 測序
