酪氨酸甲基化修饰蛋白组
酪氨酸甲基化修饰蛋白组学(tyrosine methylation proteomics)利用高分辨率质谱对酪氨酸(Tyr)残基上的甲基化修饰进行系统性鉴定与定量,揭示酪氨酸甲基化在信号转导、蛋白互作与疾病发生中的功能,是蛋白质翻译后修饰研究的重要方向。

原理介绍
酪氨酸甲基化(Tyrosine Methylation)修饰蛋白组学沿用通用翻译后修饰蛋白组(PTM)技术框架,针对 Tyr 位点的甲基化修饰,采用专属抗酪氨酸甲基化抗体进行免疫沉淀富集修饰肽段,再经高分辨质谱(Orbitrap Astral / timsTOF Pro 2)LC-MS/MS 检测与无标定量(Label-free)或代谢标记定量(SILAC / TMT)策略,实现 Tyr 甲基化位点的精准鉴定与组间差异分析。修饰位点定位概率 ≥75% 为高可信度(Class I),FDR <1% 严格过滤,配套 GO/KEGG 通路富集、蛋白互作网络等下游功能解析。注:本服务当前暂无酪氨酸甲基化专属方案文档,建议参照通用修饰蛋白组流程。
实验流程
样本预处理与蛋白制备
以强裂解液充分裂解样本,采用BCA/Bradford法准确定量;经DTT还原、IAA烷基化后以胰蛋白酶充分酶解生成肽段,供质谱检测;
修饰肽段特异性富集
通过抗酪氨酸甲基化(Tyr-Me)特异性抗体 IP 富集 Tyr 甲基化修饰肽段,富集效率验证 ≥50%,保障检测灵敏度与覆盖度;
LC-MS/MS 检测
高分辨质谱平台(Orbitrap Astral / timsTOF Pro 2)结合 DIA/DDA 模式采集,获取高质量谱图;
数据分析与功能解析
修饰位点鉴定(FDR<1%,LocProb≥75%),差异位点筛选(|FC|≥1.5,P<0.05),通路富集与PPI分析,解析功能意义;
修饰调控分析
深入评估Tyr甲基化位点上下游信号通路变化,系统解析其整体激酶调控关系与功能保守性,全面揭示修饰的潜在生物学意义,支撑机制研究。
送样标准
动物组织、细胞、植物组织、软体动物、昆虫、体液等。
常规组织送样 80 mg(风险 40 mg),预冷 PBS 清洗去除残留血液,剥离脂肪结缔组织,分割成 1 cm³ 组织块,液氮速冻 5 min,-80℃ 保存,干冰运输;送样重复数建议 ≥ 3,人源临床组织 ≥ 10。
悬浮/贴壁细胞送样 8×10^7(风险 2×10^7),液氮速冻 1 min,-80℃ 保存,干冰运输(以 HeLa 细胞为参考)。
送样 800 mg(风险 500 mg)。
送样 5 g(风险 3 g);果肉:送样 100 g(风险 50 g)。
血清/血浆送样量需咨询售前(完整糖肽 100 μL)。
送样 5 mg(风险 2 mg)。
-80℃ 保存推荐 3 年以内,分装多份避免反复冻融,干冰运输。
交付内容
数据质量控制报告
样本质量(蛋白提取量、肽段回收率 ≥80%、Tyr-Me 肽段富集效率 ≥50%);质谱检测质量(修饰位点鉴定数、肽段匹配得分、Q30 比例);定量质量(修饰位点定量 CV 值、生物学重复相关性、差异修饰位点筛选标准);
修饰定量与注释结果
定量矩阵(Tyr-Me 位点的表达量、FC 值、P 值、FDR 值);差异分析结果(差异 Tyr-Me 位点列表、火山图、热图);数据库注释(位点氨基酸类型、序列位置、蛋白功能描述);
功能分析结果
GO/KEGG/Reactome 通路富集散点图(Top 20 通路)、STRING 数据库 PPI 网络、修饰调控分析;
分析与解读报告
核心 Tyr-Me 修饰位点集合、潜在标志物/靶点候选、与疾病/表型的关联强度;核心位点功能机制与临床/研究意义解读。
