外泌體組學
挖掘細胞間通訊的微小載體，助力疾病早期篩查與精準作用機制研究。
外泌體蛋白質組
外泌體定量蛋白組是針對外泌體中蛋白質體進行系統性分離、鑑定與精準定量的高通量技術。外泌體作為細胞分泌的膜性囊泡，其攜帶的蛋白質是介導細胞間通訊的核心功能分子，不僅經囊泡膜保護，於體液中穩定性極強，還能精準反映源細胞的生理病理狀態。相較於常規細胞/組織定量蛋白組，外泌體定量蛋白組聚焦外泌體這一「功能載體」，樣品來源為無創體液，無需侵入性操作，更適合臨床動態監測與大樣本隊列研究；相較於外泌體定性蛋白組，外泌體定量蛋白組透過標記或非標記定量技術，可精準量化蛋白質表達差異，避免單純定性分析的局限性，更適用於生物標記物篩選與功能機制驗證。
原理介紹
外泌體定量蛋白組的核心原理是外泌體純化、蛋白富集與定量、質譜檢測、功能解析，具體流程如下：外泌體分離與純度驗證—分離外泌體，去除細胞碎片與游離蛋白；驗證外泌體純度；外泌體蛋白萃取與前處理；蛋白酶解與胜肽製備—將蛋白切割為長度8–20aa的胜肽；透過C18固相萃取柱脫鹽，去除裂解液雜質與鹽分，濃縮胜肽；定量標記/非標記處理；質譜檢測—採用高解析度質譜平台進行資料採集，透過「一級質譜（MS1）定量、二級質譜（MS2）定性」模式，獲得胜肽的質荷比、強度及序列資訊，確保蛋白鑑定的準確性與定量的精準度；資料分析與功能解析—將質譜資料與人類蛋白質資料庫比對，篩選高置信度蛋白；透過定量校正獲得蛋白表達量矩陣；結合GO、KEGG路徑富集分析及蛋白互作網路，挖掘差異蛋白的核心功能與調控機制。
文獻案例
《J Cachexia Sarcopenia Muscle》上題為「Proteomic profiling of human plasma extracellular vesicles identifies PF4 and C1R as novel biomarker in sarcopenia」的文章，透過收集健康對照與65歲以上肌肉減少症患者的血漿外泌體，利用蛋白質組學技術與生物資訊方法，確定了新的肌肉減少症生物標記物。研究首次對肌肉減少症患者的血漿外泌體進行蛋白質組學分析。資料顯示，來自肌肉減少症患者的血漿外泌體攜帶與鈣和膠原蛋白代謝、免疫反應和發炎相關的特定蛋白質。此外，PF4與C1R蛋白作為具潛力的診斷生物標記物，於常規臨床實務中可用於鑑別肌肉減少症，促進疾病預防與更早期的介入。
送樣標準
血清≥5mL；血漿≥5mL；尿液≥15mL；腦脊髓液≥2mL；唾液≥5mL；
≥30mL；
≥300μL；
總量≥50μg，濃度≥1μg/μL；
交付內容
資料品質管制報告
外泌體純度鑑定，NTA顆粒大小分布直方圖、Western blot標記物檢測結果、穿透式電子顯微鏡形態圖；蛋白與胜肽品質評估，蛋白萃取量、胜肽脫鹽效果、SDS-PAGE電泳圖、質譜檢測品質；定量品質評估，標記定量的同位素標籤均衡性、非標記定量的胜肽峰面積重現性；
蛋白定量與註釋結果
定量表達矩陣，所有鑑定蛋白的相對定量值、FC值、P值、FDR值；差異蛋白篩選結果，火山圖、熱圖，包含差異蛋白名稱、分子量、等電點、表達變化趨勢；資料庫註釋，蛋白的功能描述、亞細胞定位、結構域資訊、已知疾病關聯；
功能分析結果
GO/KEGG路徑富集分析圖（Top20富集路徑）、蛋白互作網路（PPI）示意圖、差異蛋白功能聚類熱圖；
分析與解讀報告
檢測結論，明確核心差異蛋白集合、潛在生物標記物候選名單、與疾病/表型的關聯強度。
常見問題
有顯著影響：①溶血—紅血球破裂釋放血紅蛋白，干擾蛋白萃取與質譜檢測；②脂血—血清中三酸甘油酯、膽固醇過多，影響外泌體分離與蛋白純度。處理方案：①樣品採集時避免劇烈震盪，及時離心分離，嚴格排除溶血、脂血樣品；②若無法重新採集，溶血樣品可透過血紅蛋白去除試劑盒處理，脂血樣品可透過超速離心去除脂質層，再進行外泌體分離。
分三步驗證：①實驗室驗證—透過Western blot、ELISA定量檢測差異蛋白於大樣本隊列（≥200例）中的表達，驗證其與疾病診斷/預後的關聯；②功能驗證—透過細胞實驗明確蛋白的生物學功能；③臨床轉化驗證—開發快速檢測試劑盒，於多中心臨床樣品中驗證其診斷靈敏度、特異性及穩定性，最終推向臨床應用。
