單細胞組學
在單細胞解析度下解析組織異質性，精準定義細胞亞群及其分化軌跡。
10x 單細胞 VDJ
10x 單細胞 VDJ 測序技術為基於 10x Genomics 微流控平台與高通量測序的免疫組學技術，核心聚焦 T 細胞受體（TCR）與 B 細胞受體（BCR）的多樣性分析，可在單個細胞層級同步獲取 T/B 細胞的受體基因序列、表達譜及細胞表型資訊，精準解析免疫細胞克隆型組成、擴增特徵及功能狀態。相較於傳統批量 VDJ 測序，該技術打破細胞群體層級的平均化侷限，能明確每個免疫細胞的受體序列與對應細胞亞群的關聯，捕捉稀有克隆、追蹤克隆擴增軌跡、揭示免疫反應的分子機制，廣泛應用於腫瘤免疫治療（如 CAR-T 療效評估）、感染性疾病免疫反應、自體免疫疾病機制研究、疫苗研發等場景。
原理介紹
10x 單細胞 VDJ 測序技術基於「單細胞捕獲—受體基因特異性擴增—高通量測序」核心邏輯，結合獨特的 Barcode 標記體系實現精準溯源：透過油包水微流控系統，將單個 T/B 細胞、攜帶專屬細胞 Barcode 與分子 Barcode 的凝膠珠與反應試劑包裹在同一微滴中，確保每個微滴僅含一個細胞。針對 TCR 的 V(D)J 區域和 BCR 的重鏈（IGH）、輕鏈（IGK/IGL）V(D)J 區域，設計特異性引子進行標靶擴增，同時利用 Barcode 序列對每個細胞的受體基因進行標記。擴增產物經文庫建構與高通量測序後，藉由細胞 Barcode 將測序資料精準分配至對應單細胞，透過序列比對與組裝，獲得每個 T/B 細胞的完整 VDJ 重排序列、克隆型分類及表達水準，同時可與單細胞轉錄組資料聯動，實現受體序列與細胞功能表型的精準匹配。
文獻案例
《Nature Cancer》發表題為 "Temporal single-cell tracing reveals clonal revival and expansion of precursor exhausted T cells during anti-PD-1 therapy in lung cancer" 的研究，依託 10x 單細胞 VDJ 測序技術，揭示肺癌抗 PD-1 治療中耗竭前體 T 細胞（Tpex）的克隆動態變化，為優化免疫治療策略提供關鍵依據。研究採集肺癌患者抗 PD-1 治療前、治療中及治療後的腫瘤組織與周邊血樣品，透過 10x 單細胞 VDJ 測序聯合轉錄組分析，追蹤 T 細胞克隆型的時空動態及功能表型。結果顯示，治療反應良好的患者中，耗竭前體 T 細胞克隆出現顯著復興與擴增，且該類克隆高表達 TCF-1，維持幹細胞樣特性。進一步驗證表明，這些擴增的耗竭前體 T 細胞克隆可分化为功能性效應 T 細胞，介導腫瘤殺傷，其克隆豐度與治療療效呈正相關。該研究透過 VDJ 測序闡明抗 PD-1 治療的核心免疫機制，為透過監測耗竭前體 T 細胞克隆動態評估療效、指導個人化治療提供分子支撐。
送樣標準
細胞濃度 1×10⁵–1×10⁶個/mL，體積≥1mL/份，無血清培養基重懸並添加 0.04% 牛血清白蛋白；4°C 冷藏運輸，避免震盪；細胞活性≥85%，優先富集 T/B 細胞（可透過流式分選），無紅血球、雜質聚團污染。
重量≥0.1g/份，取材後立即置於組織保存液中，4°C 冷藏運輸（避免冷凍），24 小時內送達；註明組織類型、部位及患者資訊，避免組織壞死，優先選擇免疫細胞富集的組織樣本。
體積≥2mL/份，EDTA 或肝素抗凝，4°C 冷藏運輸，6 小時內送達；避免溶血，可備註是否已分離周邊血單核細胞（PBMC），PBMC 樣品需保證免疫細胞活性達標。
細胞沉澱≥5×10⁶個/份，用專用免疫細胞凍存液凍存，液氮保存後乾冰運輸；解凍後立即製備單細胞懸液，全程低溫操作，註明凍存時間及解凍方法，減少細胞損傷與受體基因降解。
細胞量≥1×10⁶個/份，製備為單細胞懸液後 4°C 冷藏運輸；註明培養時間、轉染效率及體外刺激條件，確保細胞活性≥90%，便於分析 CAR-T 細胞的克隆擴增與功能狀態。
交付內容
原始測序資料
Fastq 格式原始測序 reads、測序品質管制報告（Q30 值、接頭污染率）、Barcode 分配統計及 VDJ 基因擴增資料。
資料分析報告
涵蓋 TCR/BCR 克隆型註釋結果、克隆多樣性分析圖、克隆擴增熱圖、V/J 基因使用頻率統計、受體序列特徵分析及與細胞表型的關聯結論。
常見問題
①樣品中 RNA 完整性差，導致受體基因片段降解，需優化樣品保存與運輸條件，避免 RNA 降解；②擴增過程中片段流失，可調整擴增循環數與引子濃度，減少短片段偏好；③資料分析演算法適配性不足，可優化序列組裝參數，結合公共 VDJ 資料庫輔助完整序列拼接。
借助 10x Genomics 同一平台的雙檢測方案，對同一樣本同時進行 VDJ 測序與單細胞轉錄組測序，透過共同的細胞 Barcode 實現資料關聯，將每個細胞的受體克隆型與基因表達譜精準匹配；資料分析時整合兩款資料，可明確不同克隆型 T/B 細胞的功能表型、分化狀態及訊號路徑特徵，深度解析免疫細胞功能機制。
