單細胞組學
在單細胞解析度下解析組織異質性，精準定義細胞亞群及其分化軌跡。
DNBELAB 單細胞 VDJ
DNBelab 單細胞 V(D)J 測序技術為華大基因依託自主研發的 DNBelab C4 建庫系統與 DNBSEQ 測序平台打造的高通量免疫組學技術，核心聚焦 T 細胞受體（TCR）與 B 細胞受體（BCR）的多樣性解析，可在單個細胞層級同步獲取 T/B 細胞的受體基因序列、克隆型特徵及功能表型資訊，精準追溯免疫細胞克隆起源、擴增軌跡與功能狀態。作為國產單細胞 V(D)J 技術標竿，其打破進口平台的技術與成本壁壘，依託高密度 DNB 陣列的無偏捕獲特性，兼具高通量、高靈敏度、多模態相容的核心優勢，相較於傳統批量 V(D)J 測序，能有效避免細胞群體平均化干擾，精準捕捉稀有免疫細胞克隆，同步相容單細胞轉錄組、蛋白標記資料聯動分析。該技術廣泛應用於腫瘤免疫治療療效評估、感染性疾病免疫反應解析、自體免疫疾病機制研究、疫苗研發等領域。
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原理介紹
DNBelab 單細胞 V(D)J 測序技術基於「高密度 DNB 陣列原位捕獲—標靶擴增—專屬 Barcode 標記」核心邏輯，無須依賴油包水微流控封裝，實現免疫細胞受體基因的精準解析：透過高密度 DNA 奈米球（DNB）陣列晶片，藉由靜電吸附作用原位捕獲單個 T/B 細胞，避免傳統物理封裝導致的細胞流失、變形及偏好性問題。針對 TCR 的 V(D)J 重排區域及 BCR 重鏈（IGH）、輕鏈（IGK/IGL）的 V(D)J 區域，設計特異性引子進行標靶擴增，同時引入專屬細胞 Barcode 與分子 Barcode，實現每個細胞及每條受體轉錄本的唯一標記。擴增產物經 DNB 文庫建構後，透過 DNBSEQ 測序平台完成高通量測序，依託 Barcode 序列將測序資料精準分配至對應單細胞。經序列比對、組裝與註釋，獲得每個 T/B 細胞的完整 V(D)J 重排序列、克隆型分類及表達水準，可進一步與單細胞轉錄組資料聯動，建構「受體克隆型—基因表達—細胞功能」的三維關聯圖譜，深度解析免疫反應分子機制。
文獻案例
《Nature Methods》發表題為 "Integrative mapping of human CD8⁺ T cells in inflammation and cancer" 的研究，以單細胞免疫組庫（Single-cell immune repertoire analysis）為核心，依託 DNBelab 單細胞 V(D)J 測序聯合轉錄組技術，建構百萬級人類 CD8⁺ T 細胞參考圖譜，為泛疾病免疫機制研究提供關鍵工具。研究整合 68 項研究、42 種疾病情境的 96 萬餘個細胞樣本，透過 DNBelab 技術同步捕獲 T 細胞的 TCR 免疫組庫序列與基因表達譜，結合深度學習模型 scAtlasVAE 實現大規模資料整合。結果清晰解析 CD8⁺ T 細胞的異質性特徵，鑑定出三種功能各異的耗竭型亞型，且各亞型在癌症、自體免疫病中的 TCR 克隆共享模式存在顯著差異。該研究借助 DNBelab 技術的高通量與無偏捕獲優勢，實現免疫組庫與轉錄組資料深度聯動，為跨疾病場景的 T 細胞亞型自動標註、功能解析提供標準化方案。
送樣標準
細胞濃度 1×10⁵–5×10⁶個/mL，體積≥1mL/份，無血清培養基重懸並添加 0.04% 牛血清白蛋白；4°C 冷藏運輸，避免震盪與反覆凍融；細胞活性≥85%，經流式分選富集後優先送檢，無紅血球、雜質聚團污染。
重量≥0.1g/份（腫瘤、淋巴結、脾臟等），取材後立即置於專用組織保存液中，4°C 冷藏運輸（嚴禁冷凍），24 小時內送達；註明組織類型、部位及患者資訊，避免組織壞死，適配間質豐富組織解離。
體積≥2mL/份，EDTA 或肝素抗凝，4°C 冷藏運輸，6 小時內送達；避免溶血，PBMC 需新鮮分離且活性≥90%，註明採血時間、是否經免疫刺激處理，嚴禁使用凍融血樣。
細胞沉澱≥5×10⁶個/份，用專用免疫細胞凍存液梯度凍存，液氮保存後乾冰運輸；解凍後立即製備單細胞懸液，快速洗滌去除凍存液，全程低溫操作，凍存時間不超過 3 個月。
細胞量≥1×10⁶個/份，製備為單細胞懸液後 4°C 冷藏運輸；註明培養時間、轉染效率、體外刺激條件，確保細胞活性≥90%，便於解析 CAR-T 細胞克隆擴增與功能狀態。
交付內容
原始測序資料
Fastq 格式原始測序 reads、Barcode 分配統計資料、測序品質管制報告、V(D)J 基因擴增原始資料及 DNB 文庫建構參數。
資料分析報告
涵蓋 TCR/BCR 克隆型註釋結果、克隆多樣性分析圖、克隆擴增熱圖、V/J 基因使用頻率統計、核心克隆功能關聯分析及結論解讀。
常見問題
反覆凍融會導致免疫細胞活性驟降、受體基因降解斷裂，同時釋放游離核酸污染文庫，顯著降低有效克隆型獲取量及序列完整性。若需使用凍存樣品，需採用專用免疫細胞凍存液梯度降溫凍存，解凍後 2 小時內完成建庫，全程低溫輕柔操作減少損傷。
借助 DNBelab C4 平台的多組學相容特性，對同一樣本同步開展 V(D)J 測序與單細胞轉錄組測序，透過共同的細胞 Barcode 實現資料精準關聯。資料分析時可將每個細胞的受體克隆型與基因表達譜匹配，明確不同克隆型 T/B 細胞的功能表型、分化狀態及訊號路徑特徵，深度解析免疫細胞功能機制。
溶血會釋放紅血球內的血紅素與核酸酶，不僅污染文庫影響測序品質，還會降解免疫細胞受體基因，導致有效資料量下降。避免方案：採血時輕柔操作，使用抗凝管及時搖勻，4°C 冷藏運輸避免高溫震盪，運輸時間控制在 6 小時內，發現溶血樣品需重新採集。
