蛋白質表達與檢測
提供從高靈敏度檢測到空間定位分析的全套方案，精準量化目標蛋白的表現水準
Pull-Down
蛋白下拉實驗（Pull-Down）是基於抗原-抗體結合或標籤-配體相互作用原理，於體外研究蛋白質間特異性相互作用的經典分子生物學技術。該技術可直接從細胞裂解液或蛋白混合物中「捕獲」與誘餌蛋白相互作用的目標蛋白（獵物蛋白），克服免疫共沉澱（Co-IP）依賴特異性抗體、難以研究低豐度蛋白相互的缺陷，兼具操作簡便、特異性強與結果直觀的特點。Pull-Down 技術無需維持細胞內環境，可靈活控制反應條件，既適用於驗證已知蛋白間的直接相互作用，也能透過質譜鑑定篩選誘餌蛋白的未知相互夥伴，廣泛應用於訊號路徑調控、蛋白複合物組成分析與藥物標靶篩選等領域，是解析蛋白質相互作用網絡的核心工具之一。
原理介紹
Pull-Down 的核心原理是將帶有標籤的誘餌蛋白（如 His-tag、GST-tag、Flag-tag）固定在固相載體上，利用標籤與配體的特異性結合，從樣本中捕獲能與誘餌蛋白相互作用的獵物蛋白，最終透過檢測驗證相互關係，關鍵步驟如下：建構帶有標籤的誘餌蛋白表達載體，透過原核或真核系統表達並純化誘餌蛋白；將純化的誘餌蛋白與對應標籤的固相載體（如 GST-tag 適配 GSH 瓊脂糖珠、His-tag 適配 Ni-NTA 磁珠）孵育，使誘餌蛋白透過標籤固定在載體上，形成「載體-誘餌蛋白」複合物；向複合物中加入含獵物蛋白的樣本（細胞裂解液或純化蛋白），在適宜條件下孵育，使誘餌蛋白與獵物蛋白透過特異性相互作用結合；經多次洗滌去除未結合的外源蛋白，再透過洗脫液將「載體-誘餌蛋白-獵物蛋白」複合物洗脫，最後透過 Western Blot 檢測已知獵物蛋白，或透過質譜鑑定未知獵物蛋白。
文獻案例
《Nature Communications》發表研究論文「OsMAPK6 phosphorylation and CLG1 ubiquitylation of GW6a non-additively enhance rice grain size through stabilization of the substrate」，揭示水稻籽粒大小的調控機制。研究人員推測激酶 OsMAPK6 可能磷酸化正向調控因子 GW6a。為驗證兩者直接相互，利用 GST Pull-Down 實驗，建構並純化了 GST-OsMAPK6 與 MBP-GW6a 融合蛋白。將 GST-OsMAPK6 固定於瓊脂糖珠後，與 MBP-GW6a 共孵育。Western Blot 結果顯示，實驗組洗脫液可檢出 MBP-GW6a 條帶，而空載 GST 對照組無訊號，證實體外直接相互。進一步的體內實驗於菸草葉片中完成：共表達 OsMAPK6-GFP 與 GW6a-Myc，利用 GFP 抗體進行免疫沉澱後可偵測到 Myc 訊號，表明體內複合物形成。結合後續磷酸化實驗，該研究明確 OsMAPK6 透過直接磷酸化 GW6a 特定位點來增強其穩定性，從而協同調控籽粒發育。
送樣標準
濃度≥0.5mg/mL，體積≥200μL，純度＞80%，-80℃ 保存，乾冰運輸；需提供標籤類型（GST/His/Flag 等）及純度檢測報告
濃度≥1mg/mL，體積≥1mL，-80℃ 保存，乾冰運輸；需註明細胞株名稱及處理條件，確保蛋白未降解
＞1g / 份，液氮速凍後 -80℃ 保存，乾冰運輸；需明確組織部位，避免樣本解凍
濃度≥0.3mg/mL，體積≥100μL，-80℃ 保存，乾冰運輸；需提供蛋白活性驗證報告
濃度≥500ng/μL，體積≥50μL，-20℃ 保存，冰袋運輸；需提供質體圖譜及序列資訊
交付內容
Pull-Down 原始實驗資料
Input 組、陰性對照組、Pull-Down 組的 Western Blot 原始圖譜，條帶灰階值定量分析结果；
相互驗證報告
明確蛋白間是否存在直接相互作用的結論，結合對照組結果排除偽陽性，提供條帶對比分析；
技術支援文件
提供實驗優化建議（如緩衝液配方調整、蛋白濃度優化）、常見問題排查指南，若為質譜鑑定則提供蛋白鑑定列表及生資分析報告。
常見問題
①載體或標籤非特異性結合，在反應體系中加入 1% BSA 或脫脂奶粉，封閉非特異性結合位點；②洗滌不充分，增加洗滌次數（5-6 次），或在洗滌緩衝液中適當提高鹽濃度；③獵物蛋白自身聚集，將獵物蛋白樣本離心（14000rpm，10min）去除沉澱後再使用；④誘餌蛋白純度不足，進一步純化誘餌蛋白，去除雜蛋白干擾。
①增加誘餌蛋白固定量，延長誘餌蛋白與載體的孵育時間至 4h；②提高獵物蛋白濃度，增加樣本上樣量；③優化洗脫條件，使用高濃度洗脫液（如高濃度麩胱甘肽、咪唑），或延長洗脫時間；④選擇靈敏度更高的檢測抗體，或採用化學冷光增強試劑盒提升訊號強度。
①使用純化的重組誘餌蛋白和獵物蛋白進行 Pull-Down 實驗，排除中間蛋白介導的間接相互；②建構誘餌蛋白的截短體，明確相互結構域，若截短體仍能與獵物蛋白結合，證明兩者存在直接相互；③結合雙分子螢光互補（BiFC）等細胞內原位相互技術，進一步驗證直接相互作用。
