Olink 靶向蛋白質組
Olink 靶向蛋白組學分析依託鄰位延伸技術(Proximity Extension Assay, PEA)開發,為新一代高特異性、高 multiplex 蛋白標誌物檢測技術,核心聚焦精準靶向+超微量樣本+臨床轉譯,透過雙抗體辨識與 DNA 耦合訊號放大,實現體液、細胞或組織樣本中特定蛋白質組的定量分析。核心創新在於解決傳統免疫分析通量低、樣本用量大、低豐度蛋白難偵測,以及質譜蛋白組學臨床樣本相容性差、成本高之局限。

原理介紹
Olink 蛋白組學技術為高通量蛋白檢測方法,可同時檢測數百種蛋白,且具高靈敏度與高特異性。技術原理:Probe 設計——採用 proximity extension assay(PEA)方法,以兩種具特異性的 Proximity Probe 抗體分別辨識待測蛋白不同位點,兩種 Probe 各連結一 DNA 分子,當兩者接近並結合待測蛋白時,兩 DNA 分子形成連通 DNA 鏈;擴增——所有 DNA 鏈同時被擴增為數百萬個複製物,並於擴增中添入標記核酸,標記核酸與各 DNA 鏈特測序列相符;檢測——以 Olink PCR 方法(使用 Universal PCR Probe)檢測所有擴增 DNA 鏈,PCR 反應產生螢光訊號,標記核酸序列數量與待測蛋白數量成正比。
文獻案例
《Frontiers in Neurology》所刊 “Biomarkers and therapeutic targets in early Alzheimer’s disease: an Olink proteomics study.” 納入 30 名受試者(10 名健康對照 HC、10 名輕度認知障礙 MCI、10 名 PET 確診早期 AD),採 Olink Inflammation Target 96 面板(檢測 92 種發炎相關蛋白)分析血漿樣本,探索 AD 早期診斷標誌物。相較 HC 組,AD 組 6 種蛋白顯著上調;MCI 組中 UPA 與 CDCP1 已顯著上調,提示二者可作為 AD 前驅期標誌物;功能富集顯示差異蛋白主要參與神經發炎、神經元死亡與突觸功能異常,為 AD 早期介入提供標靶。研究首度以 Olink 技術驗證血漿發炎蛋白作為 AD 早期標誌物的可行性,解決 AD 早期缺乏無創指標之痛點。
交付內容
資料品質控制報告
樣本品質:蛋白降解程度(經內參蛋白檢測評估)、污染率; PEA 反應品質:陽性對照擴增效率、陰性對照訊號、CV 值分布(≤10% 為合格); 定量品質:蛋白偵測率、批次效應校正結果(PCA 圖顯示批次聚類消失)。
蛋白定量與註釋結果
定量矩陣:Target 系列、Explore HT(npx 值),含蛋白名稱、log2FC、P 值、FDR 值; 差異分析結果:差異蛋白清單、火山圖、熱圖; 資料庫註釋:蛋白功能描述、疾病關聯、路徑歸屬、已知標誌物資訊。
功能分析結果
臨床價值分析:ROC 曲線、生存分析曲線、風險評分模型(如卵巢癌 11 蛋白簽章); 路徑富集:GO/KEGG 富集散點圖(Top20 路徑)、蛋白互作網絡; 客製化分析:大隊列樣本之蛋白–表型關聯熱圖、pQTL 關聯分析。
分析與解讀報告
核心結論:關鍵標誌物候選名單、蛋白–疾病關聯強度、臨床轉譯潛力; 結果解讀:差異蛋白之生物學意義、技術優勢說明。
常見問題
多組學聯合關鍵:樣本一致性——須使用同一來源、同批次處理樣本,避免樣本差異造成關聯偏差;調控方向匹配——關注「蛋白表達與 mRNA 一致/互補」之分子;路徑聚焦——取三組學共同富集路徑,鎖定核心調控軸;工具支援——提供「Olink–轉錄組–代謝組」整合分析模組,可自動生成調控網絡。
重複性與批次效應控制經「技術設計+實驗流程」保障。重複性:生物學重複 R²≥0.95,技術重複 R²≥0.98;批次效應控制:①實驗設計:每批加入 20% 品質管控樣本,監測批次穩定性;②資料校正:使用 Olink Insight 軟體「ComBat」演算法消除批次差異;③流程標準化:統一抗體對批次、PCR/NGS 參數、樣本處理人員;案例:UKB-PPP 計畫 54 萬樣本分 1000 批檢測,批次校正後資料一致性達 98%,支援跨批次聯合分析。
